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泰坦攜手漢諾生物、Genovis AB,開發亞基水平上糖蛋白糖鏈位點和結構分析新方案
2023-08-17



近日,泰坦科技攜手蛋白質糖基化位點及結構特異分析測試服務提供商漢諾生物、SmartEnzymes?系列酶產品制造商Genovis AB,開發推廣亞基水平上糖蛋白糖鏈位點和結構分析新方案,進一步賦能臨床醫學診斷、生物醫藥工藝及分析、糖蛋白質組學、糖科學糖工程等相關應用及研究領域。


抗體分析的不同方法



糖基化是蛋白質上一種復雜的異質修飾,在修飾位點上具有宏觀和微觀不均一性;在糖鏈結構上具有序列結構、鏈接結構、異頭異構及立體構型等多個維度。


這些修飾糖鏈以位點和結構特異的方式調控蛋白質的結構和功能(如藥物安全性、穩定性和有效性)。修飾糖鏈位點尤其是結構分析是一個巨大的挑戰。


當使用質譜分析方法時,通過酶切底物(簡化底物)減少聚糖的異質性,在亞基水平上進行表征,是糖鏈位點和結構特異分析有效的方式。




a~d單糖序列結構的準確鑒定和明確區分




相比較目前常見的完整質量和肽圖譜等分析方法,亞基水平上的分析方法具有如下優勢:

優勢

1.數據的處理更快速、實驗操作更簡單、獲得的信息更完整;

2.對高通量、自動化的應用場景更友好,并支持肽圖分析,例如克隆篩選、工藝開發和驗證以及穩定性研究;

3.可以通過使用SmartEnzymes?系列酶將抗體分解成更小的片段,提高分辨率、提升修飾鑒定水平,不僅能夠更好地識別修飾,而且能夠將它們定位到蛋白質上的單個結構域;

4.糖鏈分析配備有完備的常見物種結構特異糖鏈數據庫,基于串級質譜位點決定性碎片離子對糖基化位點進行明確定位,基于糖鏈結構診斷性碎片離子對序列和鏈接異構體進行明確區分,得到氨基酸序列、糖基化位點、糖鏈單糖組成,尤其是序列結構以及鏈接結構的全面信息;

5.適用于受控環境中的批次放行方法。



FabRICATOR酶消化IgG過程演示



FabRICATOR酶消化IgG后的亞基分析


案例分析


有科學家將FabRICATOR酶(IdeS)用于阿達木單抗(人IgG1)的亞基分析表征,并將數據與同一樣品的完整質量分析進行比較。
首先,消化抗體成更小的亞基,即FabRICATOR酶消化和還原抗體后生成Fc/2, LC和Fd',這些亞基在10分鐘內被反相LC很好地分離。這種亞基的大?。?5kDa)對于高分辨率質譜來說是絕對完美的,這可以準確地確定單同位素質量,更好地識別潛在的蛋白質修飾。
此外,由于亞基可以被分開,任何被識別的修飾都可以定位到特定的域(而對應的完整蛋白質分子水平上的分析則做不到這一點),這對于深度表征非常重要。
因此,我們只需短時間的酶消化及LC分離,就可以實現亞基分子水平上的聚糖分析,而不需要太多額外的工作,這就是亞基分析的真正力量。 


FabRICATOR消解后得到約25kDa亞基的高分辨色譜數據



亞基水平上:特定亞基上的修飾信息



同時獲得的質量測定和PTMs分析數據


泰坦科技積極拓展與國內外知名品牌的合作,不斷導入專業性品牌,以嚴格質量標準篩選各類產品,形成完善的產品集成供應體系,為廣大科研工作者提供更優質的產品與服務。





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